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抗体常见问题之WB
| 问题 | 原因 | 解决规划 |
|---|---|---|
| 条带状态不好看 | 胶凝的不均匀，，，， ，，，聚合不好 | 灌胶前将溶液充分混匀 |
| 上样齿扭曲使上样孔大幼不一 | 上样前用针头将齿拨正，，，， ，，，把稳不要将针头插入胶内 | |
| 某些样品盐浓度较高 | 除盐或将样品盐浓度调成一致 | |
| 每孔上样量不一致 | 调整上样量使根基一致 | |
| 缓冲液陈旧，，，， ，，，成分扭转 | 沉配 | |
| 凝胶下面有气泡 | 电泳前先将气泡赶走 | |
| 电泳时温度过高 | 降低电流或电压 | |
| 主张蛋白信号弱 | 样品上样量不及或主张蛋白浓度过低 | 加大上样量或浓缩样品 |
| 转膜效能低 | 以下单列 | |
| 抗体浓度低 | 增长抗体浓度或耽搁孵育功夫 | |
| 显色剂底物浓度不及 | 增长显色剂用量 | |
| 显色剂失效 | 更换显色剂（汲取A、B液的枪头不成混用） | |
| 显色或曝光功夫不及 | 耽搁显色或曝光功夫 | |
| 转膜效能低 | 转膜缓冲液pH值与主张蛋白等电点相近 | 提高转膜缓冲液pH值 |
| 凝胶与膜之间存在气泡 | 转膜前要排尽气泡 | |
| 凝胶与转印膜两侧滤纸大面积接触 | 滤纸、转印膜和凝胶大幼要根基一致，，，， ，，，预防滤纸直接接触 | |
| 转印膜种类选择不当 | 使用质量靠得住的PVDF膜或硝酸纤维素膜 | |
| 电压或电流过幼 | 湿转时20mA恒流，，，， ，，，半干转时25V左右恒压 | |
| 转印功夫过长或过短，，，， ，，，蛋白还在凝胶中或穿透转印膜 | 先电泳，，，， ，，，凭据蛋白大幼及转印装置选择相宜的转印功夫 | |
| 湿转过程中环境温度过高 | 使用预冷的转膜缓冲液或将装置至于4度 | |
| 显色或曝光后无条带 | 胶与膜方向反了 | 转膜时应顺次放好PDVF膜与凝胶所对应的电极,即凝胶对应负极,PDVF膜对应正极。。。。。 |
| 选用的一抗、二抗及显色步骤不相宜 | 选择相宜的一抗、二抗和显色步骤 | |
| 主张蛋白含量低于检测下限 | 加大上样量或浓缩样品 | |
| 抗体效价过低 | 增长抗体浓度 | |
| 抗体孵育功夫不及 | 耽搁孵育功夫，，，， ，，，37°C孵育1幼时以上 | |
| 抗体过度洗涤 | 削减洗涤功夫及次数 | |
| 参与HRP底物反映与曝光检测之间距离功夫过长 | 反映3到5分钟实时检测 | |
| 布景过高 | 封关物用量不及 | 提高封关物浓度，，，， ，，，孵育时保障封关液齐全浸没转印膜 |
| 封关物使用不当 | 检测生物素象征的蛋白时不成用脱脂奶粉封关 | |
| 封关功夫不够 | 室温37度封关1幼时以上，，，， ，，，4度封关过夜 | |
| 抗体非特异性结合 | 降低抗体浓度，，，， ，，，削减孵育功夫 | |
| 抗体浓度过高或洗涤不够 | 降低抗体浓度，，，， ，，，增长洗涤次数和功夫 | |
| 化学显色底物过多 | 按说明书参与适量的显色底物 | |
| 杂带多 | 杂蛋白多 | 处置主张蛋白 |
| 抗体特异性不强 | 使用特异性强的抗体 | |
| 抗体孵育功夫过久 | 削减抗体孵育功夫 | |
| 二抗与抗原有交叉反映 | 选择相宜的封关物 | |
| 底物显色与曝光功夫长了 | 缩短显色及曝光的功夫 | |
| 大分子量WB | 膜孔径太幼 | 更换孔径较大的膜 |
| 转膜电压电流低 | 提高电压/电流 | |
| 转膜功夫短 | 耽搁转膜功夫 | |
| 胶浓度太大 | 使用低浓度的胶 | |
| 转膜缓冲液配方不相宜 | 调整转膜缓冲液中甲醇及SDS浓度 |