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流式检测
一、项目介绍
流式细胞术是使用流式细胞仪对细胞或颗粒进行光谱鉴定、细胞分选、计数，，，，，宽泛用于分析细胞表表和细胞内分子的表白水平、鉴定样品中细胞群的分歧细胞类型、评估各细胞亚群的纯度以及分析细胞大幼和内含颗粒。。。。 。。。重要利用荧光象征的抗体检测蛋白水平，，，，，或结合了特定细胞分子的荧光染料，，，，，如PI与 DNA 的结合。。。。 。。。
二、利用
常用于细胞表表分子如表表象征物的鉴定及水平分析，，，，，以鉴定、定性或定量特定类群的细胞，，，，，能够检测细胞内蛋白表白水平，，，，，能够利用特定染料分析细胞周期、细胞凋亡，，，，，利用线粒体电位染料分析线粒体膜电位，，，，，利用DHE等染料检测细胞内ROS水平。。。。 。。。
三、流式细胞仪通路
流式细胞仪Beckman Coulter CytoFLEX；；；；；；；；光学参数：FSC（前散射）、SSC（侧散射）、4色荧光通路；；；；；；；；数据采集软件：CytExpert。。。。 。。。
| 引发波长 | 通路 | 发射波长 | 常见染料 |
| 488 nm | FL1 | 525±20 nm | FITC、EGFP、CFSE、AlexaFluor 488 |
| FL2 | 585±21 nm | PE、PI、DsRed | |
| FL3 | 690±25 nm | PerCP-Cy5.5、PC5 | |
| 638 nm | 660±10 nm | APC、Alexa Fluor 647 | |
四、了局展示
细胞周期
细胞凋亡
ROS检测
JC-1线粒体膜电位
五、样品保留运输
1、流状貌本接管当苦衷项
①细胞凋亡
必要活细胞(表地样本不接)。。。。 。。。若是细胞带荧光，，，，，肯定要在交代单和造就板上备注，，，，，不然依照无荧光处置。。。。 。。。若是因而导致检测了局不成用及样本浪费，，，，，我方概不掌管，，，，，也不接受退单。。。。 。。。
②细胞周期
周期必要细胞量比力多，，，，，6 孔板送样要求聚合度在70%以上，，，，，但不能超过90%。。。。 。。。表地样品，，，，，需用预冷的70% 乙醇固定过夜后（贴壁细胞必要消化后进行固定），，，，，离心弃固定液，，，，，加1ml PBS沉悬，，，，，封口膜封好，，，，，4℃运输寄到尝试室。。。。 。。。
③流式JC-1
必要活细胞(表地样本不接)。。。。 。。。细胞聚合度高于70%(6 孔板)，，，，，多提供2 个空缺孔，，，，，做阴性和阳性对照。。。。 。。。若是细胞带红光或绿光，，，，，不能检测。。。。 。。。
④ 流式ROS
必要活细胞(表地样本不接)。。。。 。。。细胞聚合度高于70%(6 孔板)，，，，，多提供2 个空缺孔，，，，，做阴性和阳性对照。。。。 。。。若是细胞带绿光，，，，，不能检测。。。。 。。。
⑤细胞表抗
提前确定公司是否有相应流式抗体(组化抗体不成用)，，，，，其他抗体必要客户自己提供(表地样本不接)。。。。 。。。
⑥ 流式三标
提前奉告样本具体数量和类型(血液或脾脏~)。。。。 。。。血样用抗凝管网络(胞内染色至少必要1.5 ml，，，，，表抗必要约1 ml)，，，，，把稳预防凝血，，，，，4℃保留运输。。。。 。。。血样4℃保留最多只能存放一周，，，，，功夫越久尝试了局越差。。。。 。。。取血后，，，，，需尽快寄到尝试室;取脾脏时尽量将动物带到尝试室，，，，，直接在尝试室取材后起头尝试，，，，，若不能将动物带到尝试室，，，，，取材(整个脾脏)后将组织放在含有PBS 的EP 管或离心管中，，，，，4℃保留，，，，，提细胞必须在取材后6 幼时以内实现，，，，，把稳有些检测指标(Treg,TH1, TH2 等)需无菌提取。。。。 。。。表地样本不接。。。。 。。。