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淀粉提取。。。。。。。
称取0.01~0.02g烘干样本(建议称取约0.01g)于研钵中研碎,,,,,,,,参与1mL试剂一,,,,,,,,充分匀浆后转移到EP管中,,,,,,,,80℃水浴提取30min,,,,,,,,3000g,,,,,,,,25℃离心5min,,,,,,,,弃上清,,,,,,,,留沉淀,,,,,,,,参与1mL试剂二(乙醚)振荡5min,,,,,,,,3000g,,,,,,,,25℃离心5min,,,,,,,,弃上清,,,,,,,,留沉淀,,,,,,,,参与1mL试剂三充分溶化,,,,,,,,90℃水浴10min,,,,,,,,冷却后待测。。。。。。。。
测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上,,,,,,,,调节波长至620nm,,,,,,,,蒸馏水调零。。。。。。。。
测定管:在96孔板或微量石英比色皿中顺次参与20μL样本,,,,,,,, 14μL试剂四,,,,,,,,120μL蒸馏水,,,,,,,,2μL试剂五,,,,,,,,44uL蒸馏水,,,,,,,,混匀,,,,,,,,测定620nm处吸光值,,,,,,,,记为A测定。。。。。。。。
空缺管:在96孔板或微量石英比色皿中顺次参与20μL试剂三,,,,,,,, 14μL试剂四,,,,,,,,120μL蒸馏水,,,,,,,,2μL试剂五,,,,,,,,44μL蒸馏水,,,,,,,,混匀,,,,,,,,测定620nm处吸光值,,,,,,,,记为A空缺。。。。。。。。
| 中文名称 |
直链淀粉含量试剂盒 |
| 规格 | 96样 |
| 货号 | E-356-SH |
| 价值 | ¥1500 |
| 样本类型 | 血清,,,,,,,,血浆,,,,,,,,组织匀浆,,,,,,,,细胞裂解液、细胞造就上清液等 |
| 检测领域 | 详见说明书 |
| 检测步骤 |
微板法 |
| 货期 | 3-5天 |
| 说明书 | 征询我司业务员获取 |
| 文件 |
征询我司业务员获取 |
注 意:正式测定前务必取2-3个预期差距较大的样本做预测定
测定意思:
直链淀粉是D-葡萄糖基以a-(1,4)糖苷键衔接的多糖链,,,,,,,,其含量测定对于评价食品营养价值和调查植物体内糖代谢都有沉要意思。。。。。。。。
测定道理:
利用80%乙醇能够把样品中可溶性糖与淀粉分隔,,,,,,,,直链淀粉与碘形成的络合物在620nm下有吸收峰。。。。。。。。
需自备的仪器和用品:
酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研钵、冰、乙醚和蒸馏水。。。。。。。。
试剂的组成和配造:
试剂一:液体100mL×1瓶;;;;;;4℃保留;;;;;;
试剂二:乙醚100mL×1瓶;;;;;;(自备)
试剂三:液体100mL×1瓶;;;;;;4℃保留;;;;;;
试剂四:液体2mL×1瓶;;;;;;4℃保留;;;;;;
试剂五:液体300uL×1瓶;;;;;;4℃保留;;;;;;
淀粉提取。。。。。。。
称取0.01~0.02g烘干样本(建议称取约0.01g)于研钵中研碎,,,,,,,,参与1mL试剂一,,,,,,,,充分匀浆后转移到EP管中,,,,,,,,80℃水浴提取30min,,,,,,,,3000g,,,,,,,,25℃离心5min,,,,,,,,弃上清,,,,,,,,留沉淀,,,,,,,,参与1mL试剂二(乙醚)振荡5min,,,,,,,,3000g,,,,,,,,25℃离心5min,,,,,,,,弃上清,,,,,,,,留沉淀,,,,,,,,参与1mL试剂三充分溶化,,,,,,,,90℃水浴10min,,,,,,,,冷却后待测。。。。。。。。
测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上,,,,,,,,调节波长至620nm,,,,,,,,蒸馏水调零。。。。。。。。
测定管:在96孔板或微量石英比色皿中顺次参与20μL样本,,,,,,,, 14μL试剂四,,,,,,,,120μL蒸馏水,,,,,,,,2μL试剂五,,,,,,,,44uL蒸馏水,,,,,,,,混匀,,,,,,,,测定620nm处吸光值,,,,,,,,记为A测定。。。。。。。。
空缺管:在96孔板或微量石英比色皿中顺次参与20μL试剂三,,,,,,,, 14μL试剂四,,,,,,,,120μL蒸馏水,,,,,,,,2μL试剂五,,,,,,,,44μL蒸馏水,,,,,,,,混匀,,,,,,,,测定620nm处吸光值,,,,,,,,记为A空缺。。。。。。。。
直链淀粉含量推算:
a. 用微量石英比色皿测定的推算公式如下
尺度前提下测定的回归方程为y=1.755x+0.0062;;;;;;x为尺度品浓度(mg/mL),,,,,,,,y为吸光值。。。。。。。。
1、依照蛋白浓度推算
直链淀粉含量(mg/mg prot)=[(A测定-A空缺-0.0062)×V1]÷1.755 ÷(V1×Cpr)=0.57×(A测定-A空缺-0.0062) ÷Cpr
2、按样本干沉推算
直链淀粉含量(mg/g干沉)= [(A测定-A空缺-0.0062)×V1] ÷1.755÷(W×V1÷V2) =0.57×(A测定-A空缺-0.0062) ÷W
V1:参与反映系统中样本体积,,,,,,,,0.02mL;;;;;;V2:参与提取液体积,,,,,,,,1 mL;;;;;;Cpr:样本蛋白质浓度,,,,,,,,mg/mL;;;;;;W:样本质量,,,,,,,,g
b. 用96孔板测定的推算公式如下
尺度前提下测定的回归方程为y= 0.8775x+0.0062;;;;;;x为尺度品浓度(mg/mL),,,,,,,,y为吸光值。。。。。。。。
1、依照蛋白浓度推算
直链淀粉含量(mg/mg prot)=[(A测定-A空缺-0.0062)×V1]÷0.8775 ÷(V1×Cpr)=1.14×(A测定-A空缺-0.0062) ÷Cpr
2、按样本干沉推算
直链淀粉含量(mg/g干沉)= [(A测定-A空缺-0.0062)×V1] ÷0.8775/(W×V1÷V2) =1.14×(A测定-A空缺-0.0062) ÷W
V1:参与反映系统中样本体积,,,,,,,,0.02mL;;;;;;V2:参与提取液体积,,,,,,,,1 mL;;;;;;Cpr:样本蛋白质浓度,,,,,,,,mg/mL;;;;;;W:样本质量,,,,,,,,g
最低检测限为1mg/g干沉或10μg/mgprot。。。。。。。。
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