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说话:Eng

| 中文名称 |
超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒 |
| 规格 | 96样 |
| 货号 |
A-001-SH |
| 价值 | ¥700 |
| 样本类型 | 血清,,,,,血浆,,,,,组织匀浆,,,,,细胞裂解液、细胞造就上清液等 |
| 检测领域 | 详见说明书 |
| 检测步骤 |
微板法 |
| 货期 | 3-5天 |
| 说明书 | 征询我司业务员获取 |
| 文件 | 征询我司业务员获取 |
注 意:正式测定前务必取 2-3 个预期差距较大的样本做预测定
测定意思:
SOD(EC 1.15.1.1)宽泛存在于动物、植物、微生物和造就细胞中,,,,,催化超氧化物阴离子产生岐化作用,,,,,天生 H2O2 和 O2。。。。。。SOD 不仅是超氧化物阴离子断根酶,,,,,也是 H2O2 重要天生酶,,,,,在生物抗氧化系统中拥有沉要作用。。。。。。
测定道理:
通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反映系统产生超氧阴离子(O2-),,,,,O2-可还原氮蓝四唑天生蓝色甲臜,,,,,后者在 560nm 处有吸收;;;;;;;;SOD 可断根 O2-,,,,,从而抑造了甲臜的形成;;;;;;;;反映液蓝色越深,,,,,注明 SOD 活性愈低,,,,,反之活性越高。。。。。。
需自备的仪器和用品:
酶标仪、离心理、移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配造:
提取液:液体 100mL×1 瓶,,,,,4℃保留;;;;;;;;
试剂一:液体 5mL×1 瓶,,,,,4℃保留;;;;;;;;
试剂二:液体 200μL×1 支,,,,,4℃保留;;;;;;;;
试剂三:液体 4mL×1 瓶,,,,,4℃保留;;;;;;;;
试剂四:粉剂×2 瓶,,,,,4℃保留。。。。。。
粗酶液提。。。。。。
1、细菌、细胞或组织样品的造备:
细菌或造就细胞:先网络细菌或细胞到离心管内,,,,,离心后弃上清;;;;;;;;依照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞参与 1mL 提取液),,,,,超声波破碎细菌或细胞(冰。。。。。。,,,功率 20%或 200W,,,,,超声 3s,,,,,距离 10s,,,,,沉复 30 次);;;;;;;;8000g 4℃离心 10min,,,,,取上清,,,,,置冰上待测。。。。。。
组织:依照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,,,,,参与 1mL 提取液),,,,,进行冰浴匀浆。。。。。。8000g 4℃离心 10min,,,,,取上清,,,,,置冰上待测。。。。。。
2、血清(浆)样品:直接检测。。。。。。
测定步骤:
1、 酶标仪预热 30min 以上,,,,,调节波长至 560nm。。。。。。
2、 将试剂二用蒸馏水稀释两倍,,,,,用几多配几多。。。。。。(试剂二和蒸馏水 1:1 稀释)
3、 将一瓶试剂四用 5mL 蒸馏水溶化(溶化后一周内用完),,,,,再用蒸馏水稀释 4 倍,,,,,用几多配几多(试剂四和蒸馏水 1:3 稀释)。。。。。。
4、 测定前将试剂一、三和四在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其他物种)水浴 5min 以上。。。。。。
5、样本测定(在 EP 管或 96 孔板中顺次参与下列试剂)
|
试剂名称(μL) |
测定管 |
对照管 |
|
试剂一 |
45 |
45 |
|
试剂二 |
2 |
2 |
|
样本 |
18 |
|
|
蒸馏水 |
|
18 |
|
试剂三 |
35 |
35 |
|
试剂四 |
100 |
100 |
充分混匀,,,,,室温静置 30min 后,,,,,560nm 处测定各管吸光值 A。。。。。。
当苦衷项:
1、试剂二为酶,,,,,不成冷冻,,,,,使用时在冰上搁置。。。。。。
2、对照管只必要做一管。。。。。。
3、若对照管吸光值大于 1,,,,,建议将试剂二用蒸馏水稀释 7 倍后使用(10μL 试剂二原液+60μL蒸馏水)。。。。。。
4、SOD 为什么有的样本测定管大于对照管,,,,,对照管数值在什么领域???????
对照管的领域是 0.4-1。。。。。。对照管吸光值过低可能是
(1)试剂二或试剂四没有现配现用;;;;;;;;
(2) 没有按挨次加试剂;;;;;;;;
(3)反映功夫不够,,,,,能够耽搁反映功夫(反映功夫 30min 能够耽搁到 40min)。。。。。。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。。。。。。若出现测定管大于对照管,,,,,可能是样本中杂质的影响太大,,,,,为了降低杂质的影响通常将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释 10 倍后再测,,,,,通??????D芄皇共舛ㄕ。。。。。。推算公式中乘以相应稀释倍数。。。。。。
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