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说话:Eng

| 中文名称 |
脂肪酶(LPS)试剂盒 |
| 规格 | 96样 |
| 货号 |
L-723-SH |
| 价值 | ¥600 |
| 样本类型 | 血清,,,,,血浆,,,,,组织匀浆,,,,,细胞裂解液、细胞造就上清液等 |
| 检测领域 | 详见说明书 |
| 检测步骤 |
微量法 |
| 货期 | 3-5天 |
| 说明书 | 征询我司业务员获取 |
| 文件 | 征询我司业务员获取 |
注 意:正式测定之前选择2-3个预期差距大的样本做预测定。。。。。。
测定意思:
LPS又称甘油酯水解酶,,,,,催化甘油三酯水解天生脂肪酸和甘油(或者甘油二酯和单酯)。。。。。。LPS宽泛的存在于各类生物中。。。。。。血清中LPS的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。。。。。。
测定道理:
LPS催化油酯水解成脂肪酸,,,,,利用铜皂法测定脂肪酸天生速度,,,,,即可推算LPS活性。。。。。。
自备仪器和用品:
研钵、台式离心理、震荡混匀器、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪、甲苯80mL、冰和蒸馏水。。。。。。
试剂组成和配造:
试剂一:液体65mL×2瓶,,,,,4℃保留。。。。。。
试剂二:液体10mL×1瓶,,,,,4℃保留。。。。。。每次使用前用震荡混匀器剧烈震荡20min。。。。。。
试剂三:甲苯80mL×1瓶,,,,,4℃保留(自备)。。。。。。
试剂四:液体10mL×1瓶,,,,,4℃保留。。。。。。
尺度品:液体10 μL×1瓶,,,,,10 ?mol/mL的尺度溶液,,,,,4℃保留。。。。。。临用前参与3.168 mL甲苯,,,,,充分溶化。。。。。。
粗酶液提。。。。。。
1. 组织:依照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,,,,,参与1mL试剂一)进行冰浴匀浆。。。。。。12000g,,,,,4℃离心10min,,,,,取上清置冰上待测。。。。。。
2. 细菌、真菌:依照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞参与1mL试剂一),,,,,冰浴超声波破碎细胞(功率300w,,,,,超声3秒,,,,,距离7秒,,,,,总功夫3min);;;;;;而后12000g,,,,,4℃,,,,,离心10min,,,,,取上清置于冰上待测。。。。。。
3. 血清等液体: 直接检测。。。。。。
LPS测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,,,,,调节波长到710 nm,,,,,蒸馏水调零。。。。。。
2. 试剂一和试剂二置于37℃水浴预热30min。。。。。。
3. 在1.5mL EP管中顺次参与下列试剂
|
试剂名称(μL) |
空缺管 |
测定管 |
|
蒸馏水 |
150 |
|
|
样本 |
|
50 |
|
试剂一 |
300 |
300 |
|
试剂二 |
|
100 |
37℃振荡反映10 min
|
试剂三 |
800 |
800 |
|
试剂名称(μL) |
空缺管 |
测定管 |
尺度管 |
|
上清液 |
400 |
400 |
|
|
尺度品 |
|
|
400 |
|
试剂四 |
100 |
100 |
100 |
37℃振荡反映5 min后,,,,,静置5min,,,,,取200μL上层液参与微量石英比色皿/96孔板,,,,,于710nm处测定吸光值。。。。。。
把稳:空缺管和尺度管只需测定一次。。。。。。
LPS活性推算公式:
1. 组织、细菌或细胞LPS活性
(1)依照蛋白浓度推算
活性单元界说:37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油天生1μmol脂肪酸为一个酶活单元。。。。。。
LPS (μmol/min/mg prot) = [C尺度品×(A测定管-A空缺管)÷(A尺度- A空缺管)]×V反总÷(Cpr×V样)÷T
=16×[(A测定管-A空缺管)÷(A尺度管- A空缺管)]÷Cpr
(2)依照样性质量推算
活性单元界说:37℃中每克组织每分钟水解橄榄油天生1μmol脂肪酸为一个酶活单元。。。。。。
LPS (μmol/min/g 鲜沉) = [C尺度品×(A测定管-A空缺管)÷(A尺度管- A空缺管)]×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T
=16×[(A测定管-A空缺管)÷(A尺度管- A空缺管)]÷W
(3)依照细菌或者细胞数量推算
活性单元界说:37℃中每104个细胞每分钟水解橄榄油天生1μmol脂肪酸为一个酶活单元。。。。。。
LPS (μmol /min/104cell) = [C尺度品×(A测定管-A空缺管)÷(A尺度管- A空缺管)]×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
=16×[(A测定管-A空缺管)÷(A尺度管- A空缺管)]÷细胞数量
2. 血清等液体LPS活性
活性单元界说:37℃中每毫升血清每分钟水解橄榄油天生1μmol脂肪酸为一个酶活单元。。。。。。
LPS (μmol /min/mL) = [C尺度品×(A测定管-A空缺管)÷(A尺度管- A空缺管)]×V反总÷V样÷T
=16×[(A测定管-A空缺管)÷(A尺度管- A空缺管)]
C尺度品:10 ?mol/mL;;;;;;V反总:反映总体积,,,,,0.8mL;;;;;;V样:反映中参与样本体积,,,,,0.05mL;;;;;;V样总:参与提取液体积,,,,,1mL;;;;;;Cpr:上清液蛋白质浓度,,,,,mg/mL,,,,,必要另表测定,,,,,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒;;;;;;W:样性质量,,,,,g;;;;;;T:催化反映功夫,,,,,10 min。。。。。。
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