大鼠前列腺素E2(PGE2)ELISA尝试注明
检测领域:15ng/L - 480ng/L
使用主张:
本试剂盒用于测定大鼠血清,,,,,,,血浆及有关液体样本中前列腺素E2(PGE2)含量。。。。。。。。
尝试道理:
本试剂盒利用双抗体夹心法测定标本中大鼠前列腺素E2(PGE2)水平。。。。。。。。用纯化的大鼠前列腺素E2(PGE2)抗体包被微孔板,,,,,,,造成固相抗体,,,,,,,往包被单抗的微孔中顺次参与前列腺素E2(PGE2),,,,,,,再与HRP象征的前列腺素E2(PGE2)抗体结合,,,,,,,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,,,,,,,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。。。。。。。。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,,,,,,,并在酸的作用下转化成最终的黄色。。。。。。。。色彩的深浅和样品中的前列腺素E2(PGE2)呈正有关。。。。。。。。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),,,,,,,通过尺度曲线推算样品中大鼠前列腺素E2(PGE2)浓度。。。。。。。。
标本要求 :
1.标本采集后尽早进行提取,,,,,,,提取按有关文件进行,,,,,,,提取后应尽快进行尝试。。。。。。。。若不能顿时进行试验,,,,,,,可将标本放于-20℃保留,,,,,,,但应预防反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,,,,,,,因NaN3抑造辣根过氧化物酶的(HRP)活性。。。。。。。。
操作步骤:
1.尺度品的稀释:本试剂盒提供原倍尺度品一支,,,,,,,用户可依照下列表在幼试管中进行稀释。。。。。。。。
480ng/L 5号尺度品 150μl的原倍尺度品参与150μl尺度品稀释液
240ng/L 4号尺度品 150μl的5号尺度品参与150μl尺度品稀释液
120ng/L 3号尺度品 150μl的4号尺度品参与150μl尺度品稀释液
60ng/L 2号尺度品 150μl的3号尺度品参与150μl尺度品稀释液
30ng/L 1号尺度品 150μl的2号尺度品参与150μl尺度品稀释液
2.加样:别离设空缺孔(空缺对照孔不加样品及酶标试剂,,,,,,,其余各步操作一样)、尺度孔、待测样品孔。。。。。。。。在酶标包被板上尺度品正确加样50μl,,,,,,,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,,,,,,,而后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。。。。。。。。加样将样品加于酶标板孔底部,,,,,,,尽量不触及孔壁,,,,,,,轻轻晃悠混匀。。。。。。。。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。。。。。。。。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:幼心揭掉封板膜,,,,,,,弃去液体,,,,,,,甩干,,,,,,,每孔加满洗涤液,,,,,,,静置30秒后弃去,,,,,,,如此沉复5次,,,,,,,拍干。。。。。。。。
6.加酶:每孔参与酶标试剂50μl,,,,,,,空缺孔之表。。。。。。。。
7.温育:操作同3。。。。。。。。
8.洗涤:操作同5。。。。。。。。
9.显色:每孔先参与显色剂A50μl,,,,,,,再参与显色剂B50μl,,,,,,,轻轻震荡混匀,,,,,,,37℃避鲜明色10分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,,,,,,,终止反映(此时蓝色立转黄色)。。。。。。。。
测定:以空缺孔调零,,,,,,,450nm波长依序丈量各孔的吸光度(OD值)。。。。。。。。 测定应在加终止液后15分钟以内进杏祝。。。。。。。
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