冷冻细胞活化具体步骤
冷冻准则:冷冻细胞之活化准则为急剧解冻,,,,,,,以预防冰晶沉新结晶而对细胞造成中伤,,,,,,,导致细胞之殒命。。。。。。。 细胞活化后,,,,,,,约需数日,,,,,,,或继代一至二代。。。。。。。其细胞成长或个性阐发才会复原正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。。。。。。。
一、资料 :
①37 oC 恒温水槽
②新鲜造就基
③无菌吸管/ 离心管/ 造就瓶
④液氮或干冰容器
二、操作步骤:
①操作人员应戴防护面罩及手套,,,,,,,预防冷冻管可能爆裂之中伤。。。。。。。
②自液氮或干冰容器中取出冷冻管,,,,,,,查抄盖子是否旋紧,,,,,,,由于热胀冷缩过程,,,,,,,此时盖子易松掉。。。。。。。
③将新鲜造就基置于37 °C 水槽中回温,,,,,,,回温后喷以70 % 酒精并擦拭之,,,,,,,移入无菌操作台内。。。。。。。
④取出冷冻管,,,,,,,立即放入37 °C 水槽中急剧解冻,,,,,,,轻摇冷冻管使其在1 分钟内全数消融,,,,,,,以70%ethanol 擦拭保留管表部,,,,,,,移入无菌操作台内。。。。。。。
⑤取出0.9 ml 解冻之细胞悬浮液,,,,,,,缓缓参与有造就基之造就容器内(稀释比例为1:10~1:15),,,,,,,混合均匀,,,,,,,放入CO2 造就箱造就。。。。。。。另取0.1 ml 解冻细胞悬浮液作存活测试。。。。。。。
⑥解冻后是否立即去除冷冻;;;;;;;;ぜ(例如DMSO 或glycerol),,,,,,,依细胞种类而异,,,,,,,通常而言,,,,,,,多数不必要立即去除冷冻;;;;;;;;ぜ。。。。。。。惟若要立即去除,,,,,,,则将解冻之细胞悬浮液参与含有5-10 ml 造就基之离心管内,,,,,,,离心1,000 rpm, 5 分钟,,,,,,,移去上清液,,,,,,,参与新鲜造就基,,,,,,,混合均匀,,,,,,,放入CO2 造就箱造就。。。。。。。
⑦若不需立即去除冷冻保留剂,,,,,,,则在解冻造就后隔日更换造就基。。。。。。。
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