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ELISA假阴性假阳性,无表乎这些


ELISA即酶联免疫吸附试验 ,,,,,, ,是一种常用的固相酶免疫测定步骤 ,,,,,, ,该步骤被宽泛利用于各类抗原和抗体测定。。。。。。。。

ELISA测定中影响成分较多 ,,,,,, ,并且其操作中有肯定的技术要求 ,,,,,, ,在临床检验中除正常反映表 ,,,,,, ,有时常浚???杉揭恍┟罅司郑醇傺粜曰蚣僖跣粤司郑。。。。。。。引起 ELISA 测定谬误了局的原因重要有:

①标本成分;;;;;;;;

②试剂成分;;;;;;;;

③操作成分。。。。。。。。

本文就标本成分对ELISA测定的影响做如下会商:

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血清是最常用的 ELISA 标本 ,,,,,, ,血浆通常可视为与血清一致的标本 ,,,,,, ,标本引起的假阳性和假阴性了局重要是滋扰性物质所致 ,,,,,, ,分为内源性物质和表源性物质两种。。。。。。。。

内源性物质

1.类风湿因子

人血清中 IgMIgG 型类风湿因子(RF)能够与 ELISA 系统中的捕获抗体及酶象征二抗的 FC 段直接结合 ,,,,,, ,从而导致假阳性。。。。。。。。

2.补体

ELISA系统中固相一抗和象征二抗过程中 ,,,,,, ,抗体分子产生变构 ,,,,,, ,其 FC 段的补体 C1q 分子结合位点被露出出来 ,,,,,, ,使 C1q 能够将二者衔接起来 ,,,,,, ,从而造成假阳性。。。。。。。。

3.嗜异性抗体

人类血清中含有能与啮齿类动物(如鼠等)Ig (s) 结合的天然嗜异性抗体 ,,,,,, ,可将 ELISA 系统中一抗和二抗衔接起来 ,,,,,, ,也能造成假阳性。。。。。。。。

4.嗜靶抗原的自身抗体

抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体 ,,,,,, ,有时能与靶抗原结合形成复合物 ,,,,,, ,在 ELISA 步骤中均可滋扰抗原抗体测定了局。。。。。。。。

5.医源性诱导的抗鼠 Ig (s) 抗体

临床发展的用鼠源性 CD3 等单克隆抗体医治 ,,,,,, ,用放射性同位素象征鼠源性抗体的影像诊断及靶向医治等新技术 ,,,,,, ,均有可能使这些病人体内产生抗鼠抗体;;;;;;;;另表 ,,,,,, ,被鼠等啮齿类动物咬伤的病人体内也能够产生抗鼠 Ig (s) 抗体。。。。。。。。这些病人 ELISA 测按时均可产生假阳性。。。。。。。。

6.交叉反映物质

类地高辛、类 AFP 样物质等 ,,,,,, ,是与靶抗原有交叉反映的物质。。。。。。。。在用多抗测定抗原时对测定了局影响不大 ,,,,,, ,但在用单克隆抗体测定抗原时 ,,,,,, ,若是交叉抗原决定簇正好是所用单克隆抗体相对应的靶决定簇时 ,,,,,, ,也会出现假阳性了局。。。。。。。。

7.其他

标本中其它成分的影响 血清脂质过高、胆红素、血红蛋白及血液粘度过大等 ,,,,,, ,均对ELISA测定了局有滋扰作用。。。。。。。。

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表源性物质

表源性物质时时是由于用于 ELISA 测定的血标本的采集、贮存等不当所致。。。。。。。。如标本溶血、标本被细菌传染、标本贮存过久、标本凝聚不全和采血管中增长物蹬装响。。。。。。。。

1.标本溶血

由于各类报答原因引起的标本溶血 ,,,,,, ,均可因红细胞粉碎溶化时开释出大量拥有过氧化物酶活性的血红蛋白 ,,,,,, ,在以辣根过氧化物酶为象征的 ELISA 测定中 ,,,,,, ,会导致非特异性显色 ,,,,,, ,滋扰测定了局。。。。。。。。

2.标本受细菌传染

因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶 ,,,,,, ,因而 ,,,,,, ,被细菌传染的标本同溶血标本一样 ,,,,,, ,亦可产生非特异性显色而滋扰测定了局。。。。。。。。

3.标本保留不当

在冰箱中保留过久的标本 ,,,,,, ,血清中IgG可聚合成多聚体、AFP 可形成二聚体 ,,,,,, ,在间接法ELISA测定中会导致本底过深、甚至造成假阳性;;;;;;;;

标本搁置功夫过长(如一天以上) ,,,,,, ,有时抗原或抗体免疫活性减弱 ,,,,,, ,亦可出现假阴性。。。。。。。。

4.标本凝聚不全

临床检验工作中 ,,,,,, ,有时为了争取功夫急剧检测 ,,,,,, ,常在血液还未起头凝固时即强行离心分离血清 ,,,,,, ,此时的血清中仍残留部门纤维蛋白原 ,,,,,, ,在 ELISA 测定过程中能够形成肉眼可见的纤维蛋白块 ,,,,,, ,易造成假阳性了局;;;;;;;;这类情况于次日复查时因血凝已齐全 ,,,,,, ,血清中不再有纤维蛋白原存在 ,,,,,, ,故复查了局变为阴性。。。。。。。。

5.标本管中增长物质的影响

抗凝剂(如肝素 ,,,,,, ,EDTA)、酶抑造剂(如 NaN3 可抑造 ELISA 系统中辣根过氧化物酶活性)及急剧分离血清的分离胶等均对 ELISA 测定有肯定滋扰作用。。。。。。。。

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