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说话:Eng

| 中文名称 |
多职能氧化酶(MFO)试剂盒 |
| 规格 | 96样 |
| 货号 |
L-753-SH |
| 价值 | ¥1800 |
| 样本类型 | 血清,,,,,,,血浆,,,,,,,组织匀浆,,,,,,,细胞裂解液、细胞造就上清液等 |
| 检测领域 | 详见说明书 |
| 检测步骤 |
微量法 |
| 货期 | 3-5天 |
| 说明书 | 征询我司业务员获取 |
| 文件 | 征询我司业务员获取 |
注 意 :正式测定前务必取2-3个预期差距较大的样本做预测定
测定意思:
多职能氧化酶又称混合职能氧化酶,,,,,,,可产生降解反映,,,,,,,可使原化学物质变为低毒的或无毒的物质从体内排出;;;;;还可产生激活反映,,,,,,,可使原化学物质转化为拥有亲电子性质,,,,,,,导致毒性加强,,,,,,,成为致突变物或终致癌物。。。。。。。近年来对混合职能氧化酶系与表源性化学物质相互作用的深刻钻研,,,,,,,对于闯辗视生物学水平上进一步相识表源性化学物质的毒作器拥有沉要意思。。。。。。。
测定道理:
MFO催化对硝基苯甲醚产生对硝基苯酚,,,,,,,在400nm下有特点吸光值。。。。。。。
自备用品:
酶标仪、台式离心理、可调式移液器、96孔板、研钵、冰、蒸馏水、氯仿。。。。。。。
试剂组成和配造:
提取液:液体120mL×1瓶,,,,,,,4℃保留;
试剂一:液体24mL×1瓶,,,,,,,4℃避光保留;
试剂二:粉剂×3管,,,,,,,-20℃保留;;;;;临用前取一管参与1.5mL水溶化,,,,,,,现配现用。。。。。。。
试剂三:液体24mL×1瓶,,,,,,,4℃保留;
试剂四:液体64mL×1瓶,,,,,,,4℃保留。。。。。。。
粗酶液提取。。。。。。
依照组织质量(g):提取液(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,,,,,,,参与1mL提取液),,,,,,,进行冰浴匀浆。。。。。。。12000g 4℃离心20min,,,,,,,取上清,,,,,,,置冰上待测。。。。。。。
测定步骤:
1、 酶标仪预热30min以上,,,,,,,调节波长至400nm。。。。。。。
2、在EP管中顺次参与如下试剂
|
试剂名称(μL) |
测定 |
空缺 |
|
试剂一 |
200 |
200 |
|
试剂二 |
40 |
40 |
|
提取液 |
160 |
360 |
|
样本 |
200 |
|
|
混匀,,,,,,,37℃水浴30min |
||
|
试剂三 |
200 |
200 |
别离参与1000μL氯仿,,,,,,,充分混匀萃取,,,,,,,静置10min,,,,,,,取基层氯仿层0.6mL至新的EP管钟祝。。。。。。再参与试剂四0.6mL,,,,,,,充分混匀萃取,,,,,,,取上层水相0.2mL于96孔板中,,,,,,,400nm下测定吸光值A测定与A空缺,,,,,,,△A=A测
定-A空缺。。。。。。。空缺管只需测一管。。。。。。。
MFO活性推算:
尺度曲线:y = 0.0119x + 0.0021,,,,,,,R2 = 0.9997;;;;;y,,,,,,,吸光度;;;;;x,尺度品浓度,,,,,,,单元nmol/mL。。。。。。。
(1)按样性质量推算
单元界说:每g样本每分钟产生1nmol对硝基苯酚界说为一个酶活力单元。。。。。。。
MFO(nmol/min/g 鲜沉)=(△A-0.0021)÷0.0119×V总÷(V样÷V样总×W)÷T
=8.4×(△A-0.0021)÷W
(2)按样本蛋白浓度推算
单元界说:每mg组织蛋白每分钟产生1nmol对硝基苯酚界说为一个酶活力单元。。。。。。。
MFO(nmol/min/mg prot)=(△A-0.0021)÷0.0119×V总÷(V样×Cpr)÷T
=8.4×(△A-0.0021)÷Cpr
V总:最终萃取液体积,,,,,,,0.6 mL;;;;;V样:反映中样品体积,,,,,,,200μL;;;;;T:反映功夫,,,,,,,30min;;;;;W:样品质量,,,,,,,g;;;;;Cpr:样本蛋白浓度,,,,,,,mg/mL。。。。。。。
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