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感触态细胞造备道理及步骤
目前, 感触态细胞的造备常用冰预冷的CaCl2处置细菌的步骤造备,即用低渗CaCl2溶液在低温（0℃）时处置急剧成长的细菌,从而获得感触态细菌。。。。。。此时细菌膨胀成球形,表源 DNA 分子在此前提下易形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附在细菌表表，， ，，，通过热激作用推进细胞对DNA的吸收、转化效能可达106-107转化子/微克DNA。。。。。。
操作：
1.取-70℃冰冻菌种,用划线法接种细菌于造就皿,做好象征,于37℃造就过夜。。。。。。
2.第二天,从平板上挑取单个菌落,接种至含有3ml LB造就液的试管中,37℃振荡造就过夜.次日取菌液1ml接种至含有100ml LB造就基的500ml烧瓶中,37℃剧烈震荡造就约2~3幼时（200~300r/min）。。。。。。
3.当菌落600nm OD值达到0.3-0.4时,将烧瓶取出搁置冰上10~15分钟.在无菌前提下把菌液倒入50ml离心管中.4℃,4000g离心10分钟。。。。。。
4.弃上清,将管颠倒于干滤纸上1min,吸干残留的造就液.加10ml 0.1M的CaCl2到离心管中,振荡混匀,悬浮菌体,冰浴30分钟。。。。。。
5.4℃,4000g离心10分钟,弃上清,将管颠倒于干滤纸上1min,吸干残留的造就液.加4ml冰预冷的0.1M的CaCl2,沉悬浮菌体.每管0.2ml分装,至4℃保留备用,24-48幼时内使用成效较好.若是临时不用,可再保留于-70℃的低温冰箱中。。。。。。
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